تعيين كيفيت مواد غذائي مايع و جامد با شمارش و تعيين باكتريهاي شاخص بهداشتي.
جهت كشت وشمارش كلي فرمها از دو روش استفاده مي‌شود.
كشت و شمارش در محيط مايع (MPN) Most probable number
دارو ومواد لازم:
محيط كشت آبگوشت لاكتوز دار Lactose broth
محيط كشت آبگوشت بريليانت گرين لاكتوز بايل براث Briliant Green lactosebile broth
روش آزمايش :
در ابتدا 9 لوله محتوي محيط كشت لاكتوز براث كه حاوي لوله دورهام بصورت واژگون درآن مي‌باشد آماده نموده چنانچه نمونه مورد آزمايش مايعات مانند آب و غيره باشد در سه لوله اول به هر كدام 10 ميلي ليتر و در سه لوله دوم يك سانتيمتر مكعب و در سه لوله سوم بهر كدام 1/0 ميلي ليتر از نمونه به محيط‌هاي كشت اضافه نموده وپس از مخلوط كردن آنرا مدت 24 تا 48 ساعت در گرمخانه 37 درجه سانتيگرادقرار مي دهيم سپس لوله‌هائي كه محيط را كدر كرده و يا گاز در آنها ايجاد شده جت تائيد يك حلقه كشت از آنها برداشته و در محيط بريليانت گرين لاكتوز بايل بر اث كشت داده و مجدداً بمدت 24 تا 48 ساعت در گرمخانه 37درجه سانتيگراد قرار داده چنانچه دراين محيط هم گاز ايجاد نمود برابر جدول MPN پيوست ، تعداد كلي فرمها را در 100 ميلي ليتر مايع مورد آزمايش بدست ميآيد.
چنانچه ماده غذائي جامد باشد ابتدا برابر روش اجرائي كد LQP/011 رقت‌هاي مختلف را آماده نموده و سپس در سه لوله اول محيط كشت لاكتوز براث به هر كدام يك ميلي ليتر از رقت 10/1 ودر سه لوله دوم بهر كدام يك ميلي ليتر از رقت 100/1 و در سه لوله سوم به يا در آنها گاز ايجاد شده جهت تائيد مانند روش قبل از محيط بريليانت لاكتوز بايل براث استفاده نموده و نهايتاً شمارش كلي فرمها را برابر همان جدول در يك گرم ماده غذائي بدست مي‌آوريم .
كشت و شمارش در محيط جامد :
محيط كشت ويولت رد بايل آگار (VRBA) Violet Red Bile Agar
روش آزمايش :
از رقت‌هاي آماده شده برابر روش اجرائي كد LQP/011 برداشته و برابر روش توتال كانت بصورت Pour Plate دو لايه در محيط VRBA كشت داده و پس از مدت 24 تا 48 ساعت در گرمخانه 37درجه سانتيگراد با توجه به اين كه كلي فرمها در اين محيط توليد پرگنه‌هاي قرمز ارغواني با رسوبي از صفرا در اطراف آن توليد مي‌كنند شمارش انجام مي‌گردد و سپس با توجه به رقت‌ها تعداد كلي فرمها در يك گرم ماده غذائي محاسبه مي‌گردد.
شناسائي اشر يشيا كلي :
دارو و مواد لازم آب پيتونه استريل : حاوي 10 گرم پپتن +5 گرم كلرايد سديم در يك ليتر .
معرف كواكس يامعروف آندول : پارادي متيل آمينو بنزآلدئيد 5 گرم + الكل آميليك 75 ميلي ليتر +25 ميلي ليتر اسيد كلريدريك .
روش آزمايش : بمنظور شناسائي كلي فرمهائي كه حرارت بالا را تحمل مي‌كنند مانند اشريشيا كلي ابتدا از محيط كشت مثبت كليفرمها در محيط BGLB يك حلقه كشت برداشته و در لوله‌اي كه حاوي آب پپتونه است كشت داده و مدت 24 ساعت تا 48 ساعت در دماي 44درجه سانتيگراد قرار داده و سپس 5 ميلي ليتر از محيط را به يك لوله آزمايش ديگر منتقل نموده و 3/0 ميلي ليتر از معرف كواكس به آن اضافه نموده و خوب تكان داده و بعد از 10 دقيقه ايجاد رنگ قرمز در لايه سطحي آميل الكل وجود آندول و باكتري اشريشيا مشخص مي‌گردد.
مرجع : Compendium of methods for micribiological examination of foods