آماده سازی نمونه و تهیه رقت های مختلف

آماده سازی نمونه و تهیه رقت های مختلف

هدف Purpose : ايجاد يك روش يكنواخت براي آماده سازي نمونه و تهيه رقت‌هاي مختلف .

1- 4   آماده نمودن نمونه هاي مختلف:

1-1-4 نمونه‌هاي منجمد و فريز: نمونه‌هاي منجمد قبل از آزمايش به يكي از دو روش زير ديفراست و سپس از آنها رقتها ساخته مي‌شود.

الف ) نمونه بمدت 18 تا 24 ساعت در دماي يخچال 2 تا 5درجه سانتيگراد.

ب) نمونه‌اي كه بسهولت از انجماد خارج مي‌شود بمدت 15 دقيقه در دماي 35 درجه سانتيگراد.

2-1-4  نمونه‌هاي غذائي مايع:قبل ازآزمايش وتهيه رقت بخوبي تكان داده وهموژن ويكنواخت گردد ودرزمان بازكردن درظرف              بايدازآلوده شدن آن اجتناب شود لذا بايد آن ناحيه قبلاً ضدعفوني شود.

3-1-4 نمونه‌هاي غذاهاي بسته بندي شده مانند ظروف و قوطيهاي كنسرو وغيره بايد سطوح خارجي ومحل باز كردن توسط شعله ويا الكل وياهواي داغ ضد عفوني گردد.

4-1-4 مواد غذائي خشك و پودري نيز با دقت ناحيه خاص كوچكي از آن جهت برداشت بازگردد.

2-4 در تهيه رقت‌ها  رعايت شرايط استريل الزامي بوده   ودر خردو يكنواخت وهموژن كردن نمونه با رقيق كننده ها چنانچه ازمخلوط كن  يا استوماكرستفاده مي شود بايد سعي شود تا از آسيب هاي مكانيكي و گرماي ايجاد شده با كم كردن مدت هموژنيزاسيون از آن جلوگيري نمود ضمناً از مواد غذائي جامد ونيمه جامدمانند گوشت مرغ ماهي و فرآورده ها ي آن پنير وغيره در صورت لزوم از قسمتهاي خارجي، مياني وعمقي برداشت شود تا درتفسير نتايج مشكلي پيش نيايد.جهت باز كردن قوطيهاي كنسرو بايد يك قيف واژگون استريل را متناسب با در قوطي در آن گذارده و سپس يك ميله فلزي استريل بلندي را در جهت باريك قيف داخل كرده و توسط ضربه قوطي را سوراخنمود.

3-4 تركيب رقيق كننده‌ها :  مهمترين رقيق كننده‌ها شامل آب نمك 5/8 در هزار ( سرم فيزيولوژي) با فرهاي فسفاته و محلول رينگر 4/1 است ولي چون اين محلولها در زمان طولاني براي ميكروارگانيسم‌ها زيان آور است لذا بهتر است از رقيق كنند‌هائي كه كمتر براي ميكروارگانيسم‌ها زيان آور است استفاده شود كه بهترين آنها آب پيتونه 1/0 مي باشد اينك جهت آگاهي به تركيب و نحوه ساخت رقيق‌كننده‌هاي مهم اشاره مي‌شود.

1-3-4 محلول رينگر 4/1 : كلريد سديم 9 گرم + كلريد پتاسيم 42/0 گرم + كلريد كلسيم 48/0 گرم+ بي‌كربنات سديم 24/0    گرم در حجم 4 ليتر آب مقطر كه در دماي 121درجه سانتيگراد بمدت 10 دقيقه استريل مي‌گردد،pH محلول نهائي بايد 7 باشد.

2-3-4 آب پيتونه : پيتن 10 گرم + كلريد سديم 5 گرم در حجم يك ليتر با آب مقطركه pH در 7 تنظيم گردد و سپس در دماي 121درجه سانتيگراد بمدت 15 دقيقه استريل گردد.

3-3-4 محلول بافرفسفات ذخيره : 34 گرم دي هيدروژن فسفات پتاسيم + 500 ميلي ليتر آب مقطر كه محلول به كمك سود نرمال pHآن برروي 7 تنظيم گردد و سپس با آب مقطر حجم به يك ليتر رسانده و در دماي 121 درجه سانتيگراد بمدت 15 دقيقه استريل گردد حال جهت تهيه محلول رقيق شده بافر فسفات 25/1 ميلي ليتر از بافر فسفات ذخيره را با آب مقطر به حجم يك ليتر مي‌رسانند و سپس در دماي 121درجه سانتيگراد بمدت 10 دقيقه استريل مي‌نمايند.

4-3-4 سرم فيزيولوژي : مقدار 5/8 گرم كلريد سديم خالص را با آب مقطر به حجم يك ليتر رسانده و در دماي 121درجه       سانتيگراد به مدت 10 دقيقه استريل مي‌نمايند.

4-4 تهيه رقت‌هاي اعشاري: معمولا 10 گرم از نمونه مورد آزمايش را با 90 ميلي ليتر رقيق كننده در استوماكر بصورت سوسپانسيون درآورده كه جهت اين عمل ابتدا مخلوط كن با سرعت كم وتدريجاً بمدت 1 تا 2 دقيقه با سرعت بالا عمل مخلوط كردن را ادامه مي‌دهند تا مخلوط يكنواختي از نمونه با رقت 10/1 بدست آيد. براي رقت‌هاي بعدي تعداد لازم لوله‌هاي آزمايش حاوي 9 ميلي ليتر مايع رقيق كننده را به ترتيب با برداشت يك ميلي ليتر از رقت 10/1 و افزودن به اولين لوله رقت 100/1 بدست خواهد آمد سپس يك ميلي ليتر از رقت 100/1 به لوله دوم اضافه كرده رقت 1000/1 حاصل شده و بهمين ترتيب رقتهاي بعدي در صورت نياز ساخته خواهد شد.

مرجع : sampling microbiological monitoring of environment technical series 7