شناسائي و شمارش باسيلوس سرئوس

شناسائي و شمارش باسيلوس سرئوس

داروو محيط‌هاي كشت لازم :

محيط كشت فنل رد داراي زرده تخم مرغ و پلي ميكسين Phenolred egg yolk polymyxinagar

سوسپانسيون زرده تخم مرغ برابر روش اجرائي كد LQP/015.

سولفات پلي ميكسين 1/0 درصد در آب مقطر استريل.

محيط كشت كامل شامل 90 ميلي ليتر محيط پايه فنل رد كه تا حرارت 50درجه سانتيگراد گرم گرديده به آن 10 ميلي     ليتر سوسپانسيون زرده تخم مرغ و يك ميلي ليتر محلول 1/0 درصد پلي ميكسين اضافه نموده و سپس در پليت تقسيم مي‌گردد.

معرف griess ilosovay تازه تهيه شده به نحويكه مقدار 8/0 گرم اسيد سولفانيليك را در 100 ميلي ليتر اسيد استيك 5 نرمال حل نموده و سپس در ظرف جداگانه‌اي مقدار 5/0 گرم آلفانفتيل آمين را در 100 ميلي ليتر اسيد استيك 5 نرمال حل نموده آنگاه يك ميلي ليتر از محلول اول و يك ميلي ليتر از محلول دوم را با هم مخلوط نمود توضيح اينكه براي تهيه اسيد استيك 5 نرمال مقدار 75/28 ميلي ليتر اسيد استيك گلاسيال را به آب مقطر به حجم 100 ميلي ليتر مي‌رسانند .

محيط كشت آبگوشت نیترات

روش آزمايش :

بمنظور كشت و شمارش اين باكتري از روش سطحي يا خطي استفاده مي‌شود بطوريكه پس از تهيه رقتها برابر روش اجرائي           كد LQP/011مقدار 1/0 ميلي ليتر را در سطح محيط فنل رد كشت داده و مدت 24 ساعت تا 48 ساعت در گرمخانه 35درجه سانتيگراد قرار مي‌دهند پرگنه‌هاي ايجاد شده تقريبا گرد و بزرگ كه لبه‌هاي آن ممكن است كمي كنگره‌اي باشدو هاله رسوب با كدورت مشخص در زمينه صورتي آنرا فرا گرفته دليل بر توليد لستيناز توسط باسيلوس سرئوس خواهد بود .

بمنظور تائيد مي‌توان پرگنه‌هاي توليدي را به محيط آبگوشت نيترات منتقل نموده و مدت 24 تا 8 ساعت در گرمخانه 35 درجه سانتيگراد قرار داده و سپس يك ميلي ليتر معرف griess ilosovay كه تازه تهيه شده باشد به آن اضافه نمود چنانچه رنگ صورتي يا قرمز در مدت 15 دقيقه در محيط ايجاد شد دليل بر وجود نيتريت و باسيلوس سرئوس خواهد بود.

مرجع : استاندارد ملي بر مبناي International Standard (ISO) 7932