شناسائي و جدا سازي سالمونلا

شناسائي و جدا سازي سالمونلا در 25 گرم نمونه.

دارو و مواد لازم :

محيط كشت آبگوشت لاكتوز دار Loctose broth

محيط كشت آبگوشت سلينت سيستين Selenite cystin broth

محيط كشت آبگوشت تتراتيونات حاوي سبز درخشان Tetrathionate brilliant green bile broth

محيط كشت سالمونلا شيگلا آگار (SSA)  Salmonella shigella agar

محيط كشت آگار سبز بريليانت (BGA) Brelliant green Agar

محيط كشت سه قندي آهن دار (T.S.I) Triple sugar iron Agar

محيط كشت ليزين آهن دار (LIA)Lysine Iron Agar

محيط اوره آز

25 گرم نمونه را با 225 ميلي ليتر آبگوشت لاكتوز را در داخل يك ظرف استريل به مدت 24 ساعت در دماي 37 درجه           سانتيگرادگرمخانه گذاري مي‌نمايند.

در روز دوم مقدار 1 سانتيمتر مكعب از كشت روز اول را به لوله محتوي 10 ميلي ليتر محيط كشت تتراتيونات حاوي سبز    درخشان اضافه نموده و مدت 24 ساعت در گرمخانه 37 درجه سانتيگراد قرار مي‌دهند همچنين همين عمل را بر روي محيط كشت سلينت سيستين انجام داده و گرمخانه‌گذاري مي‌نمايند.

روز سوم لوله‌هاي كشت شده روز دوم را از گرمخانه خارج كرده و با آنس پلاتين يك حلقه كشت از لوله‌هاي كشت محيط سلينت و تتراتيونات را بطور جداگانه برداشته و از هر يك در ظرف پتري يكي محتوي محيط سالمونلا، شيگلا آگار و ديگري محيط كشت آگار سبز درخشان كشت سطحي داده و بدين ترتيب چهار پليت آماده مي‌شود كه آنها را بمدت 24 ساعت در گرمخانه 37 درجه سانتيگرادقرار داده مي‌شود.

روز چهارم ظرفهاي پتري روز سوم را مورد بررسي قرار مي‌دهند و سپس از پرگنه‌هاي رشد كرده توسط آنس برداشت كرده و در دو لوله يكي محتوي محيط كشتTSIيامحيط سه قندي آهن دارو ديگري محتوي محيط كشت LIA يا محيط ليزين آهن دار كه بصورت خوابيده در لوله آزمايش آماده گرديده ابتدا در محيط TSI بطور عمقي وسطحي كشت داده وسپس با همان آنس درمحيطLIA كشت داده وآنهارامدت24 ساعت درگرمخانه 37 درجه سانتيگراد مي‌گذارند.

روز پنجم لوله‌ها را از گرمخانه خارج كرده و مورد بازرسي قرا رمي‌دهيم اكثر سالمونلاها درمحيطTSI قسمت فوقاني محيط     رابرنگ صورتي مايل به قرمزنشانة قليائي شدن محيط و قسمت عمقي را به رنگ زرد نشانه اسيدي شدن محيط يا تخميز گلوكز درآورده كه ممكن است همراه گاز سولفيد هيدروژن SH2 ويا بدون آن باشد درمحيط LIA نيز سالمونلاها تمام محيط را برنگ ارغواني نشانه واكنش قليائي درمي‌آورندكه بعلت توليدآنزيم ليزين وكربوكسيلازتوسط سالمونلا هامي‌باشد كه ليزين را تجزيه كرده است، ممكن است همراه گاز سولفيد هيدروژن و يا بدون آن باشد.

روز ششم از لوله‌هاي كشت شده TSI و LIA كه ايجاد رنگ در آن وجود سالمونلا را نشان مي دهد با آنس برداشته و در محيط

اوره آز كشت داده و مدت 24 ساعت در گرمخانه 37 درجه قرار مي‌دهنددر صورتي كه سالمونلا باشد تغييري در محيط ايجاد نمي‌شودچون سالمونلاها اوره آز منفي مي‌باشد در صورتي كه چنانچه محيط قرمز رنگ شود دليل بر ايجاد اوره آز و تجزيه اوره مي‌باشد كه اوره آز مثبت خواهد بود.

مرجع : استاندارد ملي ايران